PCR检测试剂盒使用中的注意事项说明
点击次数：1276 更新时间：2021-05-08
PCR检测试剂盒原则：
1、引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
2、引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
3、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
4、避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
5、引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
6、引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
7、引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
1、加入试剂的顺序应准确，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
2、使用干净的塑料容器配置洗涤液。
3、按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
4、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
5、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
6、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
7、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
8、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
9、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用，保质前使用。
