免疫组化（IHC）是利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的标记技术，通过化学反应使标记抗体显色，对组织细胞内的特异性抗原进行定位、定性、定量检测的一门技术。本文主要总结二抗原理及其特点，以提供更好的选择。

                                               IHC常用酶标二抗原理图

1. SABC法

原理：SABC法是利用链酶亲和素(Streptavidin)与生物素(Biotin)*的高度亲和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP，然后与链酶亲和素按一定比例混合，形成SABC复合物。用生物素化二抗与第一抗体结合，再与SABC复合物联结形成抗原～抗体～生物素化二抗～ SABC复合物。最后用底物显色剂显色。

特点：该法具有灵敏度高以及低背景染色等特点。

2. SP法

原理：根据生物素(Biotin) 与链霉亲和素(Streptavidin)具有强结合力的原理设计。在一抗（兔源与鼠源）与相应的靶抗原结合后，生物素化标记的抗多价二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记了辣根过氧化物酶（HRP）的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP 标记的链霉亲和素复合物。

特点：该法孵育时间短（通常为10min），灵敏度高以及低背景染色等特点。

3. Polymer酶标二抗法

原理：该法采用一段多聚氨基酸聚合物做为载体链，将该多聚物与二抗结合，然后可再标记上多个HRP/AP酶分子，所以同样具有很高的信号放大作用。

特点：灵敏度高；操作步骤简单；无需进行内源性的生物素封闭。

4. 直接酶标二抗法

该法是将HRP/AP酶分子直接标记于二抗上。因此需要普通的酶标二抗即可完成。实验简单，成本低，但是因为没有信号放大作用，所以对很多表达丰度不是很高的抗原就可能检测不到。