RT-PCR试剂盒两种测量方法的优缺点介绍
点击次数：864 更新时间：2022-12-26
RT-PCR试剂盒以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。
在RT-PCR试剂盒实验中，用直接法测定抗体，不能直接用酶符号测定抗体，然后直接加入底物。而要加酶标抗抗体呢？
如果将酶符号应用于待测抗体，直接法比经典法更复杂，在探索符号条件时，不能保证抗体因误操作而失活;酶标二抗目前已较为常见，被规模化，购买后使用方便。如果你直接做好了，方法已经优化了，d一抗二抗显色，总时间加起来，结果不会超过2到3小时。
RT-PCR试剂盒可以使用直接ELISA法，即抗体包板用来在抗原上标记酶，然后显色，这与直接方法相比，减少了一步的时间，缩短了时间。然而直接法和直接ELISA法各有优缺点，其要求取决于实验的具体要求。
1、要检测的抗体通常是免疫后产生的抗体。其中有免疫功能衰竭、抗体过少等因素存在。酶符号的使用存在许多不确定因素，如在使用酶符号之前无法测量效价的可能性，这会导致不必要的混淆。
2、酶联免疫吸附试验(ELISA)中酶联抗体与抗体结合后，ELISA试剂盒具有很强的信号放大作用，可使信号扩增一千倍以上，适用于低抗体含量的测定。
3、直接酶标记抗体在筛选出单克隆抗体后可以考虑，但测定系统的建立需要大量的工作。
