非蛋白质巯基(NPTs)试剂盒说明书

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 200μL×1 支，4℃保存；

试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：粉剂×2 瓶，4℃保存。

产品简介：

产品名称：非蛋白质巯基(NPTs)试剂盒说明书

规格：24样 48样

货号：AS028

检测方法：可见分光光度法 微板法

产品分类：氧化应激系列

贮存温度：2～8℃。

本试剂盒保质期：6个月。本产品仅用于科研实验。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定：

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验

样本和试剂浪费！

1、样本制备

① 组织样本：

取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min，取上清作为待测液。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取

② 细菌/细胞样本：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；

12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10

4）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

MNS1  减数分裂特异核结构1抗体 规格: 0.2ml

Phospho-Smad2(Ser245/250/255)  磷化细胞信号转导分子SMAD2抗体 规格: 0.1ml

ILVBL  乙酰合成抗体 规格: 0.2mlBCL7B  BCL7B抗体 规格: 0.2ml

DHFRL1  二叶还原样1抗体 规格: 0.2ml

PDGFC/VEGF E  小板源性生因子C抗体 规格: 0.2ml

ADAM12/MLTN  去整合样金属12抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗鸡IgM 规格: 0.1ml

Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的驴抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml

RRAD  RRAD抗体 规格: 0.2ml

CD144/VECD/VE Cadherin  上皮型钙粘附分子抗体 规格: 0.1ml

DUT  脱氧尿三磷DUT抗体 规格: 0.1mlLck/p56-LCK  淋细胞特异性激抗体 规格: 0.2ml

phospho-Tau protein(Thr489)  磷化微管相关抗体 规格: 0.1mlSmoothened/SMO  跨膜Smoothened抗体 规格: 0.1ml

非蛋白质巯基(NPTs)试剂盒说明书1818-71-9豆 规格： 20mg

107438-79-9银杏内酯J;Ginkgolide J 规格： 20mg

29232-93-7甲基磷;纯品型;标准品;有证书 规格： 0.1g

环 规格： 100mg

539-15-1大麦芽;Hordenine 规格： 20mg

19083-00-2纤细薯蓣皂 规格： 20mg

槟榔花 规格： 2g

92-61-5东莨菪内酯 规格： 20mg

22608-11-3去甲氧基姜黄 规格： 20mg

20033;古丁 规格： HPLC≥98%,20mg/支

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.        每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.       依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。