猪蓝耳病毒(欧洲株)检测试剂盒品牌

操作流程:

收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

产品特点：

◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；

◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；

◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；

◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

实时荧光定量PCR：

实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：

1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。

外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。

定量PCR方法：

a、竞争法

选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。

b、内参照法

在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测

22888-70-6飞宾;飞;利马林;2,3-二 规格： HPLC≥98%,20mg/支

6807-83-6三叶豆紫檀 规格： 20mg

4205-91-8可乐定 规格： 100mg

19879-32-4补骨脂甲;Coryfolin 规格： 20mg

470-17-7异土木香内酯 规格： HPLC≥98%，20mg/vial

75799-18-7Presapogenin CP4 规格： HPLC≥98%；5mg/支

9001-74-5青 规格： HPLC≥98%;20mg

480-40-0白杨 规格： 20mg

63238-67-5甲酰新原;甲酰中原 规格： HPLC≥98%,20mg/支

28-去甲基-β-香树脂 规格： HPLC≥98%;10mg

猪蓝耳病毒(欧洲株)检测试剂盒品牌Rabbit anti-mouse Kappa light chain/HRP  辣根过氧化物标记的兔抗小鼠k链 规格: 0.1ml

APC5  细胞分裂周期5抗体 规格: 0.2mlFAM98B  FAM98B抗体 规格: 0.2ml

ACTH (7-23)  促上皮质激ACTH (7-23)抗体 0.1ml

BRN3B/POU4F2  脑特定Brn3B抗体 规格: 0.2ml

Phospho-p56Dok2(Tyr351)  磷化D激衰减2抗体 规格: 0.1ml

Phospho-AP2M1 (Thr156)  磷化接相关复合体AP-2μ链1抗体 规格: 0.1ml

Phospho-Stat4 (Tyr693)  磷化信号转导和转录激活因子4抗体 规格: 0.1mlRabbit Anti-mouse IgM/Gold  胶体金标记的兔抗小鼠IgM 规格: 0.5ml

KLF2  肺Kruppel样因子抗体 规格: 0.2mlLAPTM4B  溶体跨膜β4抗体 规格: 0.2ml

PCDHB16  原钙粘16抗体 规格: 0.2ml

Oct-1  胚胎干细胞关键1抗体 规格: 0.1mlCXCL14  CXC趋化因子14抗体 规格: 0.2ml

OCLN/Occludin  紧密连接抗体 规格: 0.1ml

使用方法:

一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。

1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。